次氯酸发生器次氯酸水次氯酸实验论证

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公司主要研发顾问团队由日本、中国台湾以及国内的专家组成,核心技术人员由浙江大学及江南大学教授、博士和硕士组成。经过近10年的持续探索和研发投入,迅朗自主研发出的新一代ECA4.0次氯酸水生成器系列装备,其涡流混合恒温电解槽技术打破了日本技术在国际上的垄断地位,目前已获得10余项发明专利和实用新型专利。

迅朗次氯酸发生器主要的作用方式是通过其电解形成次氯酸,次氯酸进一步分解形成新的生态氧,新生态氧强的氧化性使菌体和病毒上的蛋白质等物质发生变性,由其产生的次氯酸水是一种具有高效杀菌消毒功能的“水”,可以象自来水一样使用。可替代酒精、漂白粉、84消毒液、消毒柜等消毒产品。具有安全、环保、广泛、快速、高效杀菌、不用二次冲洗,成本低廉,低残留,不会产生有害物质,使用后可直接排放等优点。可广泛应用于食品加工、农畜牧、水产、大型超市、中央厨房等行业。那么,下面就来了解一下次氯酸发生器工作原理及操作过程。

实验背景介绍

在禽肉中,鸡肉是全世界非常受欢迎的食物来源.由于鸡肉极易腐烂,因此确保鸡肉产品在储存和销售过程中不被微生物污染是非常重要的。据报道沙门氏菌,利斯特氏杆菌属,弯曲杆菌属,大肠杆菌,和金黄色葡萄球菌鸡肉中引起食物中毒。特别是,日本人有吃生鸡肉生鱼片的习俗,称为“torisashi”。在日本,生牛肝通常蘸酱油或芝麻油,是日本牛肉烧烤餐厅的一道受欢迎的菜肴。在这样的背景下,一次大规模的食物中毒爆发了,起因是一道生牛肉菜肴被肠出血性细菌污染大肠杆菌年日本发生了。此次疫情导致名患者,包括21名急性脑病患者和5名溶血性尿毒症综合征患者死亡。

前述食物中毒事件后,日本牛肉烧烤店禁止供应生肝。年4月,内阁办公室下属的食品安全小组支持限制供应生牛肝的计划。随后,在年6月,厚生劳动省禁止供应生猪肉,继年禁止供应牛肝之后。尽管厚生劳动省实施了有关鲜肉的新法规,但有效的消毒方法尚未建立。此外,许多日本公民继续希望食用生肉和牛肝。因此,需要一种减少生肉和牛肝中细菌初始数量的新方法。

为了提高鸡肉的微生物安全性,已经使用了各种技术来减少细菌污染。报道了一些使用电解水的消毒应用。Koseki和Isobe证明了碱性电解水(AlEW)和温和热处理的组合处理降低了O:H7和人口(Koseki和Isobe).最近,AlEW和柠檬酸的组合对新鲜切割的农产品或谷物上的背景菌群和食源性病原体显示出强烈的抗微生物效果(Park等人;拉赫曼等人。).然而,这些应用不适用于生肉和牛肝的灭菌。还报道了使用酸性电解水对生肉样品进行灭菌的应用(Rahman等人).然而,酸性电解水的杀菌性能在与肉中的有机物接触时变得不太明显。据报道,先用酸性电解水再用酸性电解水,可使长度单核细胞增生生物膜的形成,甚至在有机物存在的情况下(Ayebah等人。).

因此,我们评估了AlEW和强酸性电解水(StAEW)在鸡胸肉和牛肝杀菌中的应用。还有一个优点是,废水通过与AlEW和StAEW混合而变成中性。目前的研究检测了AlEW和StAEW组合处理对新鲜鸡肉和牛肉在储存期间的微生物生长、细菌毒素基因表达水平、pH、脂质氧化、颜色、氨基酸含量和感官特性的影响。

材料和方法:细菌接种物的制备

肠道沙门氏菌亚种。肠杆菌肠炎血清型菌株NBRC,ATCC,FDAP,以及S.奥里斯使用我们实验室中保存的c-29[葡萄球菌肠毒素A(SEA)生产菌株]培养物(Tsutsuura等人。).这些菌株在脑心浸液(BHI)琼脂(英国伦敦Oxoid有限公司)上传代培养。每个菌株在3毫升BHI肉汤中于37℃振荡培养16-18小时。孵育后,30μ将1升发酵肉汤转移到3毫升BHI肉汤中,在37℃下振荡培养16-18小时。通过×离心收集细菌细胞(1毫升)g5分钟,用1mL无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤两次,然后重悬于1mL相同的溶液中,以获得10的最终细胞浓度9CFU/毫升。

样品制备

新鲜、生的无骨鸡胸肉、牛肝和牛肉圆从日本静冈的肉类包装厂获得,在用于3小时内的实验之前,储存在4°C的冰箱中。每个样品部分被细分(1、5和10g),用于微生物和细菌毒素基因表达水平、pH、脂质氧化、颜色、氨基酸含量和感官分析。使用三种不同尺寸的样品来检查消毒所需的电解水的量。在各种试验之前,每种菌株的接种和未接种样品都储存在4°C。为了评估肉的质量,在用两种类型的电解水(EW)溶液处理后,将未接种的样品储存在4°C,如下所述。

处理溶液的制备

碱性电解水(AlEWpH11.5)和强酸性电解水(StAEWpH2.5)是通过使用Win-G电解装置(盖亚有限公司,东京,日本)电解稀NaCl溶液产生的。4°C时,氧化还原电位(ORP)和有效氯浓度(ACC)分别为±15mv和30±2.0mg/L。在室温(25℃)下,ORP和ACC分别为±5mV和14±1.5mg/L。

样品接种和处理

在皮肤侧的样品(1、5和10g)上接种每种细菌(南肠炎,E.和.)在10级6–logCFU/克,并让其风干15分钟。使用这种处理,在样品上获得大约5logCFU/g细菌。然后将接种的样品包装在胃袋中,并在质量分析前储存在4℃。研究了未接种样品的理化和感官属性。

消毒程序

为了检查消毒所需的电解水的量,恒定量的AlEW和StAEW用于三种不同尺寸(1、5和10g)的样品。在室温下,通过摇动(rpm)将每个接种样品(1、5和10g)浸入mLAlEW溶液(pH11.5)中3分钟,然后在7.6±1.2℃(冷藏保存)或25.2±0.1℃(室温保存)下浸入mLStAEW(pH2.5)中。在室温下,通过摇动(rpm)将中和的样品浸入mLStAEW溶液(pH2.5)中3分钟。将样品浸入毫升AlEW(pH11.5)后,对细菌总数进行计数。每种细菌在样品中的存活率以log[(处理后的CFU)/(处理前的CFU)]计算。

微生物分析

在AlEW和StAEW处理后(第0天),所有样品立即无菌放置在含有90mL无菌PBS的胃袋中,并用iMIX(Interlab;蒙蒂丽娜,罗马)。均化后,根据需要,将0.1mL等分试样的样品在0.9mL无菌PBS中连续稀释,并将0.1mL合适的稀释液涂布在每种选择性培养基上。通过将适当稀释的样品铺在BHI琼脂上来测定总活菌数。木糖赖氨酸脱氧胆酸盐(XLD;Merck,Darmstadt,Germany),XM-G(NissuipharmaceuticalCo.,Ltd.,Tokyo,Japan)和甘露醇盐琼脂(EikenChemical,Tokyo,Japan)用于物种,.山口我,还有.分别是。所有接种的琼脂平板在37℃下培养1-2天,然后计数CFU水平。在整个实验中,用无菌水处理的样品(接种的)用作对照。

RNA分离和实时聚合酶链反应(RT-PCR)

每10个0.2克样品实验性接种南奥里斯C-29,并用AlEW和StAEW进行浸渍组合处理(4℃3分钟)。将两种EW处理的样品无菌并立即置于含有90mL无菌PBS的胃袋中,并用iMIX(Interlab)匀浆5分钟。均化后,通过在4℃以10,×的速度离心3分钟来收集2mL等分的样品并保存在80°C以防止RNA降解。根据制造商的说明,使用ribopure-细菌试剂盒(Ambion,Austin,TX)纯化总RNA。用来自Taq(Takara,Shiga,日本)的SYBRPremix和RT-PCR系统热循环仪Dice进行RT-PCR?实时系统单(Takara)。RT-PCR反应混合物由0.2每种引物的摩尔/升,1×SYBR?Taq交货预混?(完全实时)预混试剂(Takara)和50ngcDNA,最终体积为25长度将每个样品标准化为16SrRNA表达。用于检测的引物海和16SrRNA如Klotz等人所述()和常等人()分别(Klotz等人。;常等人。).使用以下引物:seaforward(F),5′-aaaatacagtacctttggaaacgtt-3′和反向(R),5′-tttcctgtaaataaacgtcttgcttga-3′;16SrRNAF,5′-gcgaagaaccttaccaatc-3′和16SrRNAR,5′-ccaacattcacgacacg-3′。RT-PCR数据使用应用生物系统用户公告第2号中描述的方法。

pH测量

将每个样品(5克)在45毫升蒸馏水中均质化。样品溶液以2×的速度离心15分钟,并用pH计(pH计F-21;日本京都堀场株式会社)。在真空包装在胃袋中并置于4℃冷藏后的第0天和第7天检查pH值的评估

硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)分析

通过TBARS方法测定每个样品的脂质氧化值。每个样品(10克)在20毫升10%三氯乙酸中均质化。样品溶液以×离心离心后,将上清液(2mL)转移到一次性试管中,并加入2ml20mmol/L的2-硫代巴比妥酸溶液。将混合物涡旋并在水浴中煮沸20分钟,然后在室温下冷却10分钟。在nm处测量所得上清液的吸光度。在4℃储存条件下,在第0天和最多7天检查每个样品的脂质氧化评估值。

测色

通过视觉观察确定肉的颜色。将每个接种的样品浸入各mL的AlEW和StAEW溶液中0、3和5分钟。使用色度计CR-(KonicaMinolta,东京,日本)测量肉的色差,并用颜色表示L*(亮/暗),a*(红色/绿色)和b*(黄色/蓝色)值。色度计在整个研究过程中使用标准白色瓷砖进行校准。在真空包装在胃袋中并置于4℃冷藏后的第0天和第7天检查颜色评价

游离氨基酸和二肽分析

将每个样品(10g)在40mL2%(w/v)磺基水杨酸溶液中均质化,并在3×下离心10分钟,随后将内层以10,×的速度离心持续10分钟。将上清液通过0.45m滤膜,氨基酸和二肽(鹅肌肽和肌肽)通过自动氨基酸分析仪(日立L-;日本东京日立高技术公司)。使用#sc(PF)柱(?4.6毫米×80毫米;Hitachi,Japan)通过根据生理液体分析方法用L-PF-kit缓冲液梯度洗脱。通过测量和nm处的吸光度来检测用茚三酮后标记的氨基酸。在第0天检查游离氨基酸和二肽含量。

感官评价

九名受试者对未接种的生肉样品的新鲜度、质地、气味、腐败/腐烂和总体可接受性进行了分析。使用五点评分法评价样品的感官质量。感官评分(新鲜度、气味、腐败/腐烂和总体可接受性)为5:优、4:非常好、3:好、2:一般和1:差。在质地分析中,用手指将每个样品压过塑料包装。质地分数分为5级,5:非常硬,4:硬且硬,3:稍微硬,2:非常软且嫩,1:非常嫩。所有的肉样本都放在培养皿中。在4℃储存条件下,在第0天和最多7天检查感官评价。这项感官评估是在获得静冈大学伦理委员会(第25-42号)批准后进行的。

统计分析

所有实验在不同的日子用不同的样品重复三次。除了游离氨基酸和二肽分析之外,对每个三份重复进行分析。游离氨基酸和二肽值是两个不同样品结果的平均值。

使用单因素方差分析分析微生物学数据,使用Tukey-Kramer检验分析各组平均值之间的差异。如果方差不相等,则使用Steel-Dwass检验。SEA基因的相对基因表达和样品的一些质量变量用t使用MicrosoftExcel进行测试。所有分析的结果以平均值±标准偏差(SD)表示。通过最小二乘法确定各治疗组间平均值的差异(显著性定义为P0.05).

结果和讨论:AlEW和StAEW处理后去骨鸡胸肉和牛肝的微生物变化用次氯酸水对鸡胸肉和牛肝进行处理显著减少了细菌,实现了约1logCFU/g的减少。此外,该处理显著抑制了鸡胸肉和牛肝中细菌毒素的转录。用次氯酸水处理的样品与未处理的样品在一些肉质变量如pH、脂质氧化、颜色和氨基酸含量方面没有差异。这些结果表明,次氯酸水处理是延长鸡肉和牛肝的微生物货架期而不劣化其品质的有用的杀菌方法。目前,在日本的屠宰处理中,用自来水清洗处理过的畜体。因此,通过使用次氯酸水代替自来水,人们认为肉类的微生物安全性可以日益提高。在未来,次氯酸水有望改善各种食品制造领域中的食品安全。



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